Diagnostyka prenatalna zespołu hiper-IgM związanego z chromosomem X. czesc 4

Podczas drugiej ciąży matka chciała ustalić, czy płód dotknięty został niedoborem odporności na hiper-IgM. Próbkę kosmówkowo-kosmówkową uzyskano w 12 tygodniu ciąży, a analiza kariotypu wykazała płód jako męski. Następnie wykonano mikrosatelity ligandu CD40. Rysunek 3. Rysunek 3. Typowanie mikrosatelitarne do diagnostyki prenatalnej niedoczynności hiper-IgM. Diament oznacza płód płci męskiej, krąg matki nosicielki i kwadrat dotkniętego brata.
Analiza powtórzenia ligandu CD40 w matce okazała się przydatna: zidentyfikowano dwa różnej wielkości allele (160 i 152 bp), co umożliwiło analizę segregacji u jej dzieci (ryc. 3). Allel o długości 152 pz (allel 7) był obecny u chorego syna (podmiot II-1), identyfikując zmutowany allel. DNA trofoblastu od płodu męskiego (podmiot II-2) również wykazywało allel 152-pz, identyfikując płód jako dotknięty niedoborem odporności na hiper-IgM.
Rysunek 4. Rysunek 4. Walidacja genotypu płodu Przewidywana przez typowanie mikrosatelitarne. Zaatakowany region genomowy genu liganda CD40 amplifikowano za pomocą PCR z oligonukleotydami odpowiadającymi intronom flankującym. Przedstawiono sekwencje DNA matki i płodu (powinny być one czytane od dołu do góry), podobnie jak odpowiednie wydedukowane sekwencje aminokwasów. Kodon typu dzikiego w pozycji aminokwasowej 123 ligandu CD40 to alanina (GCG), podczas gdy zmutowany allel koduje kwas glutaminowy (GAG) w tej pozycji.
Genotyp płodu potwierdzono przez bezpośrednie sekwencjonowanie genu liganda CD40 w DNA trofoblastu. Wyizolowaliśmy i scharakteryzowaliśmy klony genomowe liganda CD40 (dane niepublikowane), które pozwoliły nam zsyntetyzować startery oligonukleotydowe flankujące dotknięty region genomowy. Zaatakowany region amplifikowano za pomocą PCR i sekwencjonowano z genomowego DNA zarówno matki, jak i płodu. Okazało się, że matka jest heterozygotą w tej pozycji genu ligandu CD40, z kodonami normalnymi (GCG) i zmutowanymi (GAG) (Figura 4). Próbka uzyskana od płodu wykazała jedynie zmutowany allel (GAG), potwierdzający status porażenia.
Dyskusja
Zidentyfikowaliśmy wewnątrzgenowe powtórzenie mikrosatelitarne w genie ligandu CD40, wysoce polimorficzny marker, który jest informacyjny u 80 procent kobiet. Poszczególne allele tego genu są segregowane u chorych osób z rodzin z zespołem hiper-IgM. Użyliśmy tego markera do prenatalnej diagnozy niedoboru odpornościowego hiper-IgM związanego z chromosomem X u samca płodu w 12 tygodniu ciąży. Ten powtórzenie mikrosatelitarnego ligandu CD40 spełnia kryteria wymagane do testu genetycznej przesiewowej dla tej choroby. Ponieważ ta powtarzająca się struktura znajduje się w 3 nieulegającym translacji regionie genu ligandu CD40, może być stosowana do identyfikacji mutacji niezależnie od ich umiejscowienia w sekwencjach kodujących ligand CD40. Ponadto, ostatnio ustaliliśmy, że powtórzenie dinukleotydu mieści się w obrębie 15 kb kodonu inicjacji genu liganda CD40 (dane niepublikowane). Zatem możliwość rekombinacji genetycznej pomiędzy powtórzeniem mikrosatelitycznym a rzeczywistym miejscem mutacji jest wyjątkowo mała (rzędu 0,01 procent).
Pacjenci z zespołem hiper-IgM mają znaczną chorobowość i zwiększone ryzyko przedwczesnej śmierci1 Dożylne podanie immunoglobuliny pozostaje podstawą leczenia, chociaż nie jest lecznicze. Jedną z alternatywnych metod leczenia jest przeszczep szpiku kostnego, ale ta opcja często jest utrudniona ze względu na brak zgodności histopatologicznych dawców. Identyfikacja liganda CD40 jako genu defektywnego w niedoborze odporności hiper-IgM sprzężonym z chromosomem X może umożliwić nowe terapie obejmujące terapię zastępczą rekombinowanymi, rozpuszczalnymi formami liganda CD40. Nadal będzie istniała potrzeba przeprowadzenia badań genetycznych, aby umożliwić diagnostykę prenatalną i zidentyfikować nosicieli tej choroby. Powtórzone powtórzenie CA może być pomocne w poradnictwie genetycznym dla niedoboru odpornościowego z hiper-IgM sprzężonego z chromosomem X.
Finansowanie i ujawnianie informacji
Wspierany przez granty z Association Francaise contre les Myopathies, Ministere de la Recherche et de la Technologie, Caisse Nationale d Assurance Maladie des Travailleurs Pensies i INSERM.
Author Affiliations
Od INSERM Unite 132, Hopital Necker-Enfants Malades, Paryż (JPD, SM, AF, GSB) oraz Glaxo Institute for Molecular Biology, Plan-les-Ouates, Genewa (J.-FG, J.-YB).
Zwróć się z prośbą o przedruk do Dr. DiSanto z INSERM Unite 132, Hopital Necker-Enfants Malades, 149, rue de Sevres, 75743 Paris CEDEX 15, France.
[patrz też: skierowanie do pracowni diagnostycznej, usg tarczycy bydgoszcz, panorama zębów ]

Powiązane tematy z artykułem: panorama zębów skierowanie do pracowni diagnostycznej usg tarczycy bydgoszcz